蛋白質(zhì)單點(diǎn)質(zhì)譜分析分子量測定

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上海容大檢測認(rèn)證

宋詩文/Pines.song
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檢測服務(wù)：
1)二維電影2DE電泳: 雙向凝膠電泳是將不同種類的蛋白質(zhì)按照等電點(diǎn)和分子量差異進(jìn)行高分辨率分離的分析方法。成功的二維電泳可以將2000到3000種蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，是目前唯一的同時(shí)能分離成百上千種蛋白質(zhì)的工具。通過對(duì)蛋白質(zhì)雙向電泳的圖譜掃描，用相關(guān)軟件（PDQUEST等）進(jìn)行圖譜差異分析，找到差別點(diǎn)。然后把差別點(diǎn)切出，進(jìn)行脫色、酶解。最后樣品進(jìn)入質(zhì)譜測試，得到質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)文件。通過搜庫可得到差別點(diǎn)蛋白質(zhì)的詳細(xì)信息。
儀器: Biorad, pharmacia 電泳儀
2)蛋白質(zhì)鑒定
a)蛋白質(zhì)單點(diǎn)質(zhì)譜鑒定：考染/銀染
儀器： ABI 5800 MALDI TOF/TOF
b)大規(guī)模混合蛋白質(zhì)鑒定：針對(duì)液體或SDS-PAGE條帶的復(fù)雜混合物用酶（Trypsin）酶解成肽段混合物，這些肽段混合物再通過液相色譜分離(如2DLC(陽離子柱SCX和C18反相柱串聯(lián))或1DLC 的C18反相柱)，再用串聯(lián)質(zhì)譜測試，然后在相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫檢索進(jìn)行鑒定，可同時(shí)鑒定成百上千種蛋白質(zhì)。
儀器：LTQ orbitrap, Thermo; Waters Nano Aquity UPLC
3）蛋白質(zhì)后修飾分析
很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化、糖基化、乙酰化等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式，而在生命現(xiàn)象的許多關(guān)鍵調(diào)節(jié)機(jī)制中，蛋白質(zhì)的翻譯后修飾與信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期，生長發(fā)育以及癌癥機(jī)理等諸多生物學(xué)問題有密切關(guān)系。因此，對(duì)于蛋白質(zhì)后修飾的研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要意義。
儀器: LTQ orbitrap, Thermo; Waters Nano Aquity UPLC
4）蛋白質(zhì)分子量測定
a) 蛋白質(zhì)：樣品蛋白質(zhì)分子離子化后，通過質(zhì)量分析器對(duì)離子質(zhì)荷比(M/Z)進(jìn)行分析，或進(jìn)一步通過演算法（如高斯算法）得到蛋白質(zhì)的精確分子量。
b)化合物：利用質(zhì)譜或HPLC對(duì)化合物樣品分子量作分析。
5）蛋白質(zhì)，化合物純度測定
HPLC，樣品通過HPLC，根據(jù)HPLC峰測定樣品純度。
儀器：Agilent 1200
6) 蛋白質(zhì)全序列測定
蛋白質(zhì)全序列分析是分析各個(gè)肽段而拼湊出原來的蛋白質(zhì)序列。由于在液相色譜—質(zhì)譜的分析中很難得到百分之百的回收率，有些分子量較小的氨基酸很容易流失而無法得到其序列，因此目前的方法是使用不同的酶對(duì)標(biāo)定蛋白質(zhì)酶解，再透過二級(jí)質(zhì)譜的方法來鑒定肽段的序列。科致的蛋白質(zhì)組學(xué)專家經(jīng)驗(yàn)豐富，對(duì)已知或未知的蛋白質(zhì)序列，均有能力為客戶完成所需分析。
儀器：LTQ orbitrap, Thermo; Waters Nano Aquity UPLC，MALDI 5800 TOF/TOF.
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